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細胞內的物質運輸系統實驗步驟之!
（二）蛋白質內胞作用一：霍亂毒素次單元B （Cholera Toxin subunit-B；CTB-594 nm；紅光）之運輸
1. 取4×104個COS-7細胞至12-well plate的單一培養井（well）中，經隔夜培養約16~24小時。
2. 取出培養液，加入含有螢光標定的CTB，濃度為1μg/μl，體積200μl至每一個培養井內，并置入攝氏4度的冰箱10分鐘。
3. 將細胞自冰箱取出，立刻放入二氧化碳培養箱，溫度攝氏37度，二氧化碳濃度5 %，30分鐘，促使 CTB 能從細胞膜運送至高基氏體處。
4. 取出后，以PBS清洗一次，再以濃度4 % 的福馬林進行固定15分鐘。
5. 以 PBS 清洗一次，加入含有0.01 % Triton X-100、0.05 % SDS的清潔劑，靜置15分鐘，以增加細胞膜的通透性。
6. 以 PBS 清洗二次，加入含有皂素（saponin）、牛血清白蛋白質（Bovine Serum Albumin；BSA）的阻斷緩衝液，靜置30分鐘，以阻斷抗原與抗體間非專一性的結合。
7. 取出阻斷緩衝液后，加入含有抗高基氏體標示蛋白質Golgin-245的抗體（來自老鼠的單株抗體；一級抗體），靜置30分鐘。
8. 以 PBS 清洗四次，加入含有螢光標定的二級抗體（抗老鼠之免疫球蛋白；綠光），以及 DNA 染劑 Hochest33258，靜置30分鐘。
9. 以 PBS 清洗四次，待自然風乾后，于載玻片上滴入封片液，進行封片。
10. 以螢光顯微鏡觀察標示蛋白質在細胞內的分布情形。
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