房山細胞內的物質運輸系統實驗步驟之哺乳動物細胞的繼代培養!
作者: 發布時間:2022-07-02 21:06:02點擊:4001
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細胞內的物質運輸系統實驗步驟之哺乳動物細胞的繼代培養!
(一)哺乳動物細胞的繼代培養
1. 以攝氏37度水浴預熱培養液(含有10 % 胎牛血清之 DMEM培養液 )及 Trypsin (胰蛋白酶)溶液。
2. 以無菌操作方式倒掉舊的培養液,加入1 × PBS溶液(磷酸緩衝液;細胞等張溶液)5 ml,清洗細胞表面。
3. 倒掉清洗液,加入 Trypsin 溶液,靜置3分鐘,使細胞脫離培養皿表面。
4. 加入含有胎牛血清之培養液5 ml以終止Trypsin的作用后,置入離心機,離心轉速為每分鐘1500轉,共2分鐘。
5. 倒掉培養液,加入新鮮的培養液,計數細胞數目后取約2 × 105 個細胞至直徑為10 mm的培養皿。補充培養液體積至10 ml后,在培養皿上寫上細胞名稱、繼代數目、日期、細胞數目,將細胞放入二氧化碳培養箱。
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