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一、 鏡檢法
取糞便加約十倍量之百分之○．五胰蛋白脢（Trypsin）溶液后置室溫三十至六十分離并偶而搖動(dòng)，促其消化，消化液經(jīng)紗布過(guò)濾，濾液以三千至四千轉(zhuǎn)（3000 -4000rpm）遠(yuǎn)心分離三十分鐘，取沉淀物作涂抹片標(biāo)本。再以抗酸性菌染色法（Ziehl-Neelsen 法）染色，鏡檢；或取直腸黏膜涂抹于玻片上，以抗酸性菌染色法（Auramine-0 法）染色六分鐘，再以百分之○．一高錳酸鉀液脫色制成染色標(biāo)本，以螢光顯微鏡鏡檢。
二、 培養(yǎng)法
取糞便一公克，加約四十公撮之百分之五草酸或百分之四氫氧化鈉溶液，混合均勻后，置于細(xì)長(zhǎng)量筒中，靜置三至四分鐘，取上清液約十五公撮置于攝氏三十七度恒溫水槽內(nèi)三十分鐘，再以細(xì)目金屬網(wǎng)過(guò)濾，濾液以三千至五千轉(zhuǎn)（3000-5000rpm）遠(yuǎn)心分離三十分鐘，其沉渣與少數(shù)蒸餾水混合均勻后接種于副結(jié)核菌分離用培養(yǎng)基斜面，并以橡皮塞密封，置于攝氏三十七度恒溫箱中培養(yǎng)三個(gè)月。
取腸管洗去腸內(nèi)容物，以刀或玻片刮取腸黏膜，將腸黏膜或腸間膜淋巴結(jié)切細(xì)后，加十倍量之百分之○．五胰蛋白脢溶液，置室溫三十至六十分鐘，其沉渣加二至三倍之百分之四氫氧化鈉液混合后，接種于副結(jié)核菌分離用培養(yǎng)基斜面，并以橡皮塞密封，置于攝氏三十七度恒溫箱中培養(yǎng)三個(gè)月。
三、 副結(jié)核菌素皮內(nèi)注射法
以副結(jié)核菌素○．二毫升，注射于頸側(cè)皮內(nèi)，經(jīng)四十八小時(shí)，使用直徑測(cè)微尺測(cè)定注射局部之腫脹厚度與注射前同一局部厚度之差額，比較判定之。
四、 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)
抗原：診斷用抗原以鎂生理食鹽水稀釋。
血清：供檢血清經(jīng)攝氏五十六度三十分鐘非動(dòng)化后以鎂生理食鹽水稀釋成五倍、十倍、二十倍.. ..。
紅血球：百分之三綿羊血球液。
溶血素：抗綿羊紅血球血清三單位。
補(bǔ)體：兩單位。
反應(yīng)溫度及時(shí)間：攝氏四至八度經(jīng)十八至二十四小時(shí)。
五、 綜合判定標(biāo)準(zhǔn)
陽(yáng)性：
1. 臨床上呈現(xiàn)本病特有之征狀，如慢性頑固性下痢，營(yíng)養(yǎng)不良，泌乳量降低等，且鏡檢法或培養(yǎng)法之結(jié)果呈抗酸性菌陽(yáng)性者。
2. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以上且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于十倍或高于十倍時(shí)，顯示百分之百阻止溶血者。
疑陽(yáng)性：
1. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差未達(dá)三公厘，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于十倍或高于十倍時(shí)，顯示百分之百阻止溶血者。
2. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在四公厘以上，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍時(shí)，顯示百分之五十以下阻止溶血者。
3. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以上，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍時(shí)，顯示百分之七五至百分之百阻止溶血者。
陰性：
1. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以下，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍或五倍以下，顯示百分之五十以下阻止溶血者。
2. 皮內(nèi)注射反應(yīng)腫脹差在三公厘以上，四公厘以下，且補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)之血清稀釋倍數(shù)于五倍以下顯示百分之五十以下阻止溶血者。
六、 複檢
疑陽(yáng)性者應(yīng)于初檢后三個(gè)月再複檢一次，其結(jié)果仍呈疑陽(yáng)性或轉(zhuǎn)呈陽(yáng)性者為陽(yáng)性，轉(zhuǎn)為陰性者為陰性。
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