朝陽成骨細(xì)胞凋亡導(dǎo)致骨小梁變薄!穿透式電子顯微鏡進(jìn)行組織學(xué)分析
作者: 發(fā)布時間:2022-07-02 21:06:28點(diǎn)擊:7079
信息摘要:
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成骨細(xì)胞凋亡導(dǎo)致骨小梁變薄!穿透式電子顯微鏡進(jìn)行組織學(xué)分析
在不同的生理、病理環(huán)境下多種類型的硬組織細(xì)胞也可發(fā)生凋亡。而先前體內(nèi)及體外的實(shí)驗均已證實(shí)成骨細(xì)胞、
軟骨細(xì)胞及蝕骨細(xì)胞都有凋亡現(xiàn)象;在正常或病理性的骨骼中,骨細(xì)胞亦存在凋亡現(xiàn)象。這意味著骨轉(zhuǎn)換與可控的骨細(xì)胞死亡間存在功能上的聯(lián)繫。
骨細(xì)胞的凋亡亦可能破壞了骨細(xì)胞的機(jī)械性或創(chuàng)傷性感受器作用,延遲了受損骨組織的清除,進(jìn)而增加骨折的風(fēng)險。
相較骨細(xì)胞而言,成骨細(xì)胞的凋亡作用則較;不清楚。先前的研究顯示,隨著年齡的增長,成骨細(xì)胞的凋亡會導(dǎo)致細(xì)胞基質(zhì)沈積減少及骨小梁變薄,
這些均是與年齡相關(guān)的骨喪失特征。先前對牽引性骨形成過程中細(xì)胞增殖的研究顯示,牽引速度可激發(fā)和影響細(xì)胞的增殖,
且再生過程中細(xì)胞群體的組成是不斷變化的,由此推測增殖和凋亡細(xì)胞的比例亦可能是變化的。因此,明確凋亡細(xì)胞的群體,
細(xì)胞死亡的時間週期以及影響凋亡過程的相關(guān)因素對理解凋亡過程是很重要的。此研究假設(shè)牽引性骨形成中細(xì)胞凋亡可能是骨再生過程的重要因素之一,
且再生組織中細(xì)胞的凋亡激發(fā)了快速的骨組織重建。而此研究目的便是驗證上述的假說。
材料與方法=====================================
實(shí)驗采用兔脛骨延長的動物模型,每天延長0.7 mm,歷時三週,每週拍攝X光片確定延長程度;且應(yīng)用HE染色及穿透式電子顯微鏡進(jìn)行組織學(xué)分析;TRAP(抗酒石酸鹽酸性磷酸酯合成酶)染色識別骨骼中的蝕骨細(xì)胞;應(yīng)用TUNEL標(biāo)記法(Terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated digoxingenin-dUTP nicked labeling TUNEL)進(jìn)行DNA片段分析識別凋亡細(xì)胞。
結(jié)果=========================================
放射學(xué)及組織學(xué)分析顯示延長間隙可分;三區(qū):
纖維中央?yún)^(qū)(FZ),X光片不顯影、初始礦化區(qū)(PMF)、新骨形成區(qū)(NBZ,包括已礦化的編織骨和板層骨)。
穿透式電子顯微鏡可對上述三區(qū)細(xì)胞凋亡的不同階段變化進(jìn)行定性觀察。其中,成骨細(xì)胞凋亡的各階段變化均可看到,
尤以PMF和PMF與 NBZ的交界區(qū)凋亡的細(xì)胞數(shù)量最多。TUNEL標(biāo)記法屬于半定量分析,以-、+、++及 +++四個等級來表示凋亡細(xì)胞的數(shù)量。
結(jié)果顯示,凋亡細(xì)胞主要分佈于纖維組織與礦化前緣新骨間的移行區(qū),鄰近或粘附于中央?yún)^(qū)附近的新骨表面。在斷端附近的成熟骨組織上TUNEL標(biāo)記則明顯減少。TRAP染色陽性的分佈區(qū)與TUNEL標(biāo)記相似,同時蝕骨細(xì)胞的TRAP染色;陽性。
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