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一、 鏡檢法
取糞便加約十倍量之百分之○．五胰蛋白脢（Trypsin）溶液后置室溫三十至六十分離并偶而搖動，促其消化，消化液經紗布過濾，濾液以三千至四千轉（3000 -4000rpm）遠心分離三十分鐘，取沉淀物作涂抹片標本。再以抗酸性菌染色法（Ziehl-Neelsen 法）染色，鏡檢；或取直腸黏膜涂抹于玻片上，以抗酸性菌染色法（Auramine-0 法）染色六分鐘，再以百分之○．一高錳酸鉀液脫色制成染色標本，以螢光顯微鏡鏡檢。
二、 培養法
取糞便一公克，加約四十公撮之百分之五草酸或百分之四氫氧化鈉溶液，混合均勻后，置于細長量筒中，靜置三至四分鐘，取上清液約十五公撮置于攝氏三十七度恒溫水槽內三十分鐘，再以細目金屬網過濾，濾液以三千至五千轉（3000-5000rpm）遠心分離三十分鐘，其沉渣與少數蒸餾水混合均勻后接種于副結核菌分離用培養基斜面，并以橡皮塞密封，置于攝氏三十七度恒溫箱中培養三個月。
取腸管洗去腸內容物，以刀或玻片刮取腸黏膜，將腸黏膜或腸間膜淋巴結切細后，加十倍量之百分之○．五胰蛋白脢溶液，置室溫三十至六十分鐘，其沉渣加二至三倍之百分之四氫氧化鈉液混合后，接種于副結核菌分離用培養基斜面，并以橡皮塞密封，置于攝氏三十七度恒溫箱中培養三個月。
三、 副結核菌素皮內注射法
以副結核菌素○．二毫升，注射于頸側皮內，經四十八小時，使用直徑測微尺測定注射局部之腫脹厚度與注射前同一局部厚度之差額，比較判定之。
四、 補體結合反應
抗原：診斷用抗原以鎂生理食鹽水稀釋。
血清：供檢血清經攝氏五十六度三十分鐘非動化后以鎂生理食鹽水稀釋成五倍、十倍、二十倍.. ..。
紅血球：百分之三綿羊血球液。
溶血素：抗綿羊紅血球血清三單位。
補體：兩單位。
反應溫度及時間：攝氏四至八度經十八至二十四小時。
五、 綜合判定標準
陽性：
1. 臨床上呈現本病特有之征狀，如慢性頑固性下痢，營養不良，泌乳量降低等，且鏡檢法或培養法之結果呈抗酸性菌陽性者。
2. 皮內注射反應腫脹差在三公厘以上且補體結合反應之血清稀釋倍數于十倍或高于十倍時，顯示百分之百阻止溶血者。
疑陽性：
1. 皮內注射反應腫脹差未達三公厘，且補體結合反應之血清稀釋倍數于十倍或高于十倍時，顯示百分之百阻止溶血者。
2. 皮內注射反應腫脹差在四公厘以上，且補體結合反應之血清稀釋倍數于五倍時，顯示百分之五十以下阻止溶血者。
3. 皮內注射反應腫脹差在三公厘以上，且補體結合反應之血清稀釋倍數于五倍時，顯示百分之七五至百分之百阻止溶血者。
陰性：
1. 皮內注射反應腫脹差在三公厘以下，且補體結合反應之血清稀釋倍數于五倍或五倍以下，顯示百分之五十以下阻止溶血者。
2. 皮內注射反應腫脹差在三公厘以上，四公厘以下，且補體結合反應之血清稀釋倍數于五倍以下顯示百分之五十以下阻止溶血者。
六、 複檢
疑陽性者應于初檢后三個月再複檢一次，其結果仍呈疑陽性或轉呈陽性者為陽性，轉為陰性者為陰性。
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